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原代細胞培養的步驟一般是:取材→分離→培養和維持,今天我們重點介紹原代細胞的取材和分離方法。
一、取材
人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件,直接影響細胞的體外培養。
取材的基本要求:
①取材要注意新鮮和保鮮
②應嚴格無菌
③防止機械損傷
④去除無用組織和避免干燥
⑤應注意組織類型、分化程度、年齡等
⑥作好記錄
各類組織的取材技術:
①皮膚和粘膜的取材
主要取自于手術過程中的皮片,方法似外科取斷層皮片手術操作,但面積一般2~4平方厘米。
②內臟和實體瘤的取材
內臟除消化道外基本是無菌的,但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位,實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區域,要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結締組織。
③血液細胞的取材
血細胞、淋巴細胞的取材,一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞,取材時應注意抗凝。
④骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材
嚴格無菌,注意抗凝,還要盡快分離培養,離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養液洗一次后即可培養,不宜低溫存放。
http://www.whprocell.com/Products-35905664.html
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